Análisis de proliferación y diferenciación celular en organoides de colon murino expuestas al medio condicionado L-WRN y evaluación de la expresión del receptor de tiamina (THR1)
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Date
2022-01-20
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Publisher
Universidad Católica de Santa María
Abstract
En los últimos años, los organoides han sido considerados como una de las innovaciones
revolucionarias del mundo científico, ya que se trata de un gran avance en la investigación
biológica y biomédica moderna. El desarrollo del modelo organoide pretende simular la
fisiología y procesos bioquímicos de un ser vivo desde una perspectiva molecular hasta un
enfoque celular, tisular y orgánico, razón por la cual son denominados como “mini-órganos”.
Los organoides intestinales cobran gran importancia en estudios bioquímicos y
farmacológicos, debido a que son considerados como modelos 3D que permitirían la
evaluación de la eficacia y seguridad de compuestos. El presente estudio pretende lograr la
conformación del cultivo organoide de colon expuestas al medio condicionado L-WRN y
despliega el análisis de proliferación y diferenciación celular de células madre adultas
haciendo uso de biomarcadores de proliferación (Ki67) y de células madre (LGR5); además
de la evaluación de la expresión del receptor de tiamina 1 (THR1). La obtención de
organoides surgió a partir del aislamiento de criptas intestinales de colon murino C57BL/6J
sometidas a un cultivo 3D. Paralelamente, se cultivó otra línea celular denominada “LWRN”
que nos permite la obtención del medio condicionado L-WRN, el cual permitió el
cultivo de células madre presentes en los organoides. El análisis de la expresión genética de
MKi67, LGR5 y SLC19A2a a partir de ARNm haciendo uso de PCR cuantitativa en tiempo
real (RT-qPCR) permitió identificar el lote de medio condicionado L-WRN más adecuado
para el ensayo. El biomarcador de proliferación Ki67 tuvo gran expresión relativa en el lote
1 con respecto al lote 3, con una diferencia significativa de 0.8255 (P ˂ 0.05, IC 95%); así
también como la expresión del biomarcador de células madre LGR5 fue favorecida por lote
Ancient, siendo la diferencia significativa más alta con respecto al lote 3, dando por resultado
0.9745 (P ˂ 0.05, IC 95%). La expresión del gen SLC19A2 para el receptor de tiamina 1
(THR1) estuvo presente en los cuatro grupos de estudio y en mayor proporción en el último
lote de medio condicionado L-WRN, el cual obtuvo la diferencia significativa más
considerable con respecto al lote Ancient, con un valor numérico de -1.794 (P ˂ 0.05, IC
95%).
Description
Keywords
Organoides, Células madres, Criptas intestinales, Medio condicionado