Validación de un método para Coliformes Totales y Escherichia coli utilizando el medio de cultivo comercial cromogénico CCA ( AGAR para Coliformes Chromocult), en quesos no madurados, 2023
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Date
2023-12-05
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Publisher
Universidad Católica de Santa María
Abstract
En el Laboratorio de Ensayo y Control de Calidad (LECC) de la Universidad Católica de Santa
María de la ciudad de Arequipa, una de las muestras de mayor concurrencia son los quesos no
madurados. El queso representa uno de los productos lácteos de mayor consumo en el Perú, por
lo que su análisis es de suma relevancia. El LECC realiza análisis microbiológicos en una amplia
variedad de alimentos de consumo humano, que deben cumplir con una calidad microbiológica,
en el que se evalúa la inocuidad alimentaria y la calidad comercial del producto. Los quesos no
madurados que tienen bastante afluencia en el laboratorio deben de someterse a este análisis de
calidad, y dentro de este, se encuentra el análisis de recuento de coliformes totales y E. coli
siendo el CCA (Agar para Coliformes Chromocult) uno de los medios más utilizados, sin
embargo, este no se encuentra validado para esta muestra de alimento según la ISO
(Organización Internacional de Normalización) y por ende tampoco se encuentra validado en el
LECC de la UCSM. Es por ello que, en el presente trabajo, se evaluó a este medio de cultivo en
base a la ISO 16140-4 “Protocolo para la validación de métodos alternativos (registrados) frente
a los métodos de referencia”.
Las muestras de quesos no madurados (fresco, lluta, mantecoso, mozzarella, ricotta y serranito)
fueron obtenidos del mercado San Camilo de tres tiendas comerciales, obteniendo en total 18
quesos. El estudio fue observacional. La recolección de las muestras de quesos no madurados se
realizó en el mes de Julio del 2023. Los datos recolectados se almacenaron en Microsoft Excel
para realizar la estadística correspondiente. La recuperación relativa de coliformes totales y E.
coli en CCA en comparación con TSA (Agar Triptona Soja) fue aceptable (101 % y 96 %), la
desviación estándar interna de repetibilidad (0,00266 y 0,00287) y reproducibilidad (0,14870 y
0,17401) fueron suficientes. El rango de trabajo se estableció entre 10 - 150 UFC (Unidades
Formadoras de Colonias) por placa según la ISO 4832. En el parámetro de precisión se obtuvo
como desviación estándar de repetibilidad, para el método de coliformes totales de referencia
fue 0,084 y para el alternativo 0,058, en el caso de la determinación de E. coli se obtuvo una
desviación estándar de repetibilidad para el método de referencia de 0,076 y para el alternativo
de 0,095, estos resultados se encuentran dentro del rango de los límites de aceptabilidad (AL) y
además se calcularon los intervalos de tolerancia esperados (β-ETI) que cumplen con la
condicional Upper β-ETI ≤ AL y Lower β-ETI ≥ -AL, por lo tanto el método alternativo es
aceptado como equivalente al método de referencia. La veracidad relativa se confirmó por un
gráfico de dispersión que mostró la distribución alrededor de la línea diagonal, indicando que si
vi
existe concordancia entre los resultados de ambos métodos. Así mismo, se realizó el método de
Bland-Altman que consiste en comparar dos métodos diferentes y analizar su concordancia en
base a una misma variable, en el caso de coliformes totales y E. coli se obtuvo un límite superior
(0.20715 y 0.24126) y un límite inferior (-0.02903 y -0.08165), donde la mayoría de los datos
obtenidos se encuentran dentro de los límites y cumple con lo establecido por el parámetro. En
conclusión, el método para el recuento de coliformes totales y E. coli utilizando el medio de
cultivo comercial cromogénico CCA, demostró ser útil para la cuantificación simultánea de
ambos microorganismos en quesos no madurados, y por lo tanto puede ser validado para este
método (52).
Description
Keywords
Validación, Quesos no madurados, Coliformes Totales