Efecto del Inhibidor MG132 sobre el Sistema Ubiquitina Proteosoma, la Citotoxicidad, Agregación Proteica y los Niveles de Proteína LRP1 en Células HEPG2
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Date
2017-08-22
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Universidad Católica de Santa María
Abstract
El sistema Ubiquitina-proteosoma, es un proceso proteolítico implicado en la degradación de proteínas dañadas y mal plegadas. Las proteínas sometidas a este evento deben conjugarse con uno o más monómeros de ubiquitina, un proceso conocido como ubiquitinización. La inhibición del sistema Ubiquitina-proteosoma produce agregación de proteínas que causan citotoxicidad. La proteína 1 relacionada con el receptor de lipoproteínas de baja densidad (LRP1) es un receptor transmembrana, el cual está implicado en la captación de moléculas a través de la vía clatrina para transporte transcelular o degradación lisosomal. La inhibición del sistema mencionado por MG132 aumenta la vida media de LRP1 en células HepG2 según indican estudios previos. Por el contrario, la agregación de proteínas podría tener un papel en la reducción de los niveles de LRP1.
El propósito de esta investigación es demostrar que MG132, inhibidor del sistema Ubiquitina-proteosoma, induce citotoxicidad, agregación de proteínas y además reduce los niveles de la proteína LRP1 en células HepG2. Estas células se trataron durante 24 horas con diferentes concentraciones de MG132 (0,03 – 3,0 µM) reduciendo la viabilidad celular de una manera dependiente a la concentración, determinada por la reacción de 3-(4,5-dimetiltiazol-2- il)-5-(3-carboximetoxifenil)-2- (4-sulfofenil)-2H-tetrazolio, en el ensayo MTS. Los lisados de células enteras se extrajeron y separaron en SDS-PAGE. Se realizaron varias pruebas de Western Blot, como técnica para determinar los niveles de LRP1 y la unión de K48 a proteínas ubiquitinadas. Bajo concentraciones de 0,3 y 1,0 µM de MG132, aumentaron las proteínas ubiquitinadas unidas a K48 y se redujeron los niveles de la proteína LRP1 de una manera dependiente a la concentración.
PALABRAS CLAVE: sistema Ubiquitina-proteosoma, proteína 1 relacionada con el receptor de lipoproteínas de baja densidad, inhibidor del sistema Ubiquitina-proteosoma, agregación de proteínas.
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Keywords
sistema Ubiquitina-proteosoma, proteína 1 relacionada con el receptor de lipoproteínas de baja densidad, inhibidor del sistema Ubiquitina-proteosoma, agregación de proteínas