Determinación del Efecto de Bafilomicina A1 Y Mg132 Sobre el Tiempo de Vida Media de la Proteína 1 Relacionada al Receptor de la Lipoproteína de Baja Densidad (Lrp1) en Células de Carcinoma Hepático (Hepg2)
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Date
2018-10-11
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Publisher
Universidad Católica de Santa María
Abstract
El Alzheimer, enfermedad neurodegenerativa en la cual se produce un declive
cognitivo, se produce por la sobreacumulación de péptido de β-amiloide (Aβ) en la
corteza, ya sea por un desequilibrio entre la tasa de eliminación y producción o por
factores genéticos. Se sabe que la degradación de Aβ a nivel cerebral esta dado por
enzimas producidas en neuronas, neuroglias, entre otras, y que a nivel periférico el Aβ
tiene una degradación hepática. La proteína 1 relacionada al receptor de lipoproteína
de baja densidad (LRP1) es una proteína-receptor endocítico que se expresa en los
hepatocitos, neuronas, astrocitos entre otras. Este receptor a nivel cerebral puede
mediar la salida de Aβ a través de la barrera hematoencefálica y es sLRP1 quien
transporta el Aβ hasta los hepatocitos para su degradación, siendo internalizado por
LRP1 expresado en hepatocitos. El objetivo fue determinar la principal vía de
degradación de LRP1 y cuantificar su vida media en células HepG2. La metodología
utilizada consistió en que primero se cultivó este tipo de células para luego tratarlas
con un inhibidor de la vía de degradación lisosomal-autofágica (Bafilomicina A1) y
un inhibidor de la vía de degradación ubiquitina-proteosoma (MG132). Luego, se
probó diferentes concentraciones de Cicloheximida con el fin de encontrar la
concentración óptima para inhibir la síntesis de proteínas en las células HepG2, para usar esta concentración en los experimentos para la determinación del tiempo de vida
media de LRP1. Finalmente, se realizó la determinación del tiempo de vida media de
LRP1, igualmente en células tratadas con Bafilomicina A1 y MG132. Los resultados
demostraron que la principal vía de degradación para LRP1 es la degradación
lisosomal-autofágica, además que la vida media de LRP1 es de 7.67 ± 0.05 horas y
esta se ve incrementada significativamente en presencia de Bafilomicina A1 (22.03 ±
0.05 horas) y se ve disminuida significativamente en presencia de MG132 (7.1 ± 0.1
horas). En conclusión, esta investigación demuestra que el tiempo de acción de LRP1
se puede aumentar mediante la inhibición de su principal vía de degradación y por lo
tanto esta acción mejoraría el papel de LRP1 en el organismo, especialmente la
internalización de las proteínas dañinas y su posterior degradación.
Description
Keywords
LRP1, β-amiloide, Sistema de degradación lisosomal, Sistema de proteosomaubiquitina, Bafilomicina A1, MG132, tiempo de vida media