Aislamiento y cultivo de células del quiste radicular inflamatorio y expresión del Gen P53
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Date
2022-11-09
Authors
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Publisher
Universidad Católica de Santa María
Abstract
El quiste radicular inflamatorio es considerado como una de las lesiones odontogénicas
más frecuentes dentro del campo odontológico, presentando sus características clínicas y
radiográficas particulares. En la histopatología encontramos gran cantidad de fibroblastos
de los cuales, presentan cúmulos de colonias celulares. El objetivo de esta investigación
es el aislamiento y cultivo de células madre del quiste radicular inflamatorio, para su
caracterización a un nivel morfológico y molecular. Esta investigación partió desde la
hipótesis de saber si las células madre del quiste radicular inflamatorio presentan
alteración en su ADN y en la búsqueda de la presencia de la sobre expresión de P53. Los
protocolos de aislamiento en el transcurso de la investigación tuvo modificaciones por la
necesidad de la búsqueda del mejor método de cultivo, esto permitió su comparación con
otros.
En la metodología se usó un protocolo modificado que se extrajo de la modificación de
varios protocolos para obtener el más apropiado para el aislamiento de nuestras células
madre junto con la técnica de viabilidad celular. La expresión de p53 se evaluó por
inmunofluorescencia y para la búsqueda de mutaciones se utilizó el software IGV.
Las células madre de quiste son células alargadas, planas, de apariencia fibroblástica,
sobre expresan la proteína p53 y presentan mutaciones que por primera vez se reportan
en esta tesis. El protocolo modificado evidencia una buena viabilidad celular al momento
de aislar células madre. Las mutaciones se encontraron en posiciones específicas la
presencia de mutación en la secuencia del exón 1 chr 17: 7675089 (GrCh38) de variante
missense en los alelos de G > C y con 7 mutaciones en el exón 4 en el chr 17: 7673787
con alelo G > A, el chr 17: 7673782 con alelo T > C, chr 17: 7673780 con alelo T > A y
chr 17: 7673743 con alelo C > T, chr 17: 7673783 con alelo C > G y el chr 17: 7673780
con el alelo T > C y chr 17: 7673786 con alelo G > A, estas 3 últimas mutaciones, no se
encuentran mencionadas en la literatura, lo que indica que por primera vez reportamos
este tipo de mutación para p53
Se puede determinar un aislamiento de células madre del quiste radicular inflamatorio por
medio de un protocolo modificado o adaptado a nuestras necesidades de cultivo. También
a través de un análisis de la viabilidad celular, la eficacia del método, descripción
morfológica de las colonias de células fibroblásticas, la presencia de p53 en el núcleo
como en el citoplasma y las mutaciones de p53 a nivel del exón 1 y 4.
Description
Keywords
Viabilidad celular, Quiste radicular, Células madre