Expresión de RORyt y RORy en diferentes tipos celulares y bajo diferentes condiciones de estimulación
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Date
2021-02-17
Authors
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Publisher
Universidad Católica de Santa María
Abstract
RORγ y RORγt son isoformas del gen humano RORC, difiriendo en el extremo N-terminal.
RORγ se expresa en una amplia variedad de tejidos, como hígado, pulmón y músculo
esquelético, entre otros; mientras que, RORγt se expresa exclusivamente en ciertas células
del sistema inmune. RORγt es considerado como el factor de transcripción maestro de los
linfocitos Th17. Estos linfocitos son de gran importancia en el estudio del VIH ya que son
las primeras células que se infectan luego del ingreso del virus al organismo.
El objetivo del presente trabajo fue cuantificar la expresión de RORγ y RORγt en diferentes
tipos celulares utilizados en la investigación del VIH. Se estableció que un ensayo de RTPCR
es adecuado para la cuantificación de ambas isoformas en las células estudiadas. Los
resultados mostraron que RORγt se expresa de manera preferencial en células Jurkat y en
linfocitos T CD4+ humanos, mientras que RORγ lo hace en las células TZM-bl y HT-29.
Adicionalmente, se utilizó el análisis por citometría de flujo para medir la expresión de
RORγt en linfocitos T CD4+ luego de diferentes estimulaciones. El ARNm de RORγt es
inducible mediante anti-CD3/CD28 en linfocitos T CD4+, pero no en células Jurkat ni en
células ACH-2. A nivel de proteína, RORγt sólo es inducido por anti-CD3/CD28, pero no
por PMA/Ionomicina ni IL-2, luego de 24 h de estimulación.
En conclusión, la técnica RT-PCR es un ensayo cuantitativo apropiado para evaluar la
expresión en tiempo real de RORγt y RORγ en diferentes tipos celulares, los cuales se
utilizan ampliamente en la investigación del VIH, contribuyendo al estudio de la infección
y la latencia de dicho virus. Las isoformas RORγt y RORγ presentan una expresión
diferencial en células Jurkat y linfocitos T CD4+, y en células TZM-bl y HT-29,
respectivamente. Asimismo, su expresión varía bajo diferentes condiciones de estimulación.
La estimulación del TCR con anti-CD3/CD28 es la más apropiada para estudiar la expresión
de RORγt, tanto a nivel de ARNm como de proteína, en linfocitos T CD4+, ya que induce la
expresión de esta isoforma. Por el contrario, ninguna de las estimulaciones evaluadas induce
la expresión de RORγ.
Description
Keywords
RORγt, RORγ, Linfocitos Th17, Inmunología