Examinando por Autor "Carpio Carpio, José Miguel"

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    Aislamiento, purificación y expresión de los péptidos: N-glicosidasa F de Flavobacterium meningosepticum y Mannosil-Glicoproteina Endo-Beta-N Acetilglucosaminidasa ( Endoglicosidasa H) de Streptomyces plicatus, a partir de Escherichia coli empleando el vector pBluescript KS
    (Universidad Católica de Santa María, 2024-01-03) Díaz Delgado, Gabriela Elvira
    La expresión heteróloga de proteínas ha permitido la producción de las mismas a gran escala, sin necesidad de hacer grandes extracciones o procesos sumamente largos y complicados, además que en la mayoría de los casos difícilmente se puede conseguir grandes cantidades desde sus fuentes naturales. Este trabajo de tesis tiene como objetivo contribuir en el campo de la farmacia y la biotecnología en proteínas recombinantes con dos enzimas en particular, el Péptido: Nglicosidasa F más conocido como PNGase y mannosil-glicoproteina endo-β-Nacetilglucosaminidasa (endoglicosidasa H) más conocido como Endo H. El trabajo constituye de 3 fases, la primera, la correcta identificación y transformación del ADN que sintetiza ambas proteínas; la segunda, la correcta expresión de ellas en medio bacterial, y la tercera, en su purificación de acuerdo a las propiedades, en este caso particular ambas con residuos de histidina en su extremo C. Se estudió estas enzimas, por su alta demanda en trabajo de laboratorio, por un lado, el Péptido: N-glycosidasa F (PNGase F) es el método enzimático más eficaz para eliminar casi todos los oligosacáridos unidos a N de las glicoproteínas. La PNGase F es una amidasa, que se escinde entre los residuos más internos de GlcNAc y asparagina de oligosacáridos con alto contenido de manosa, híbridos y complejos. Y por otro lado la endoglicosidasa H es una glucosidasa recombinante que se escinde dentro del núcleo de quitobiosa de manosa alta y algunos oligosacáridos híbridos de glicoproteínas N-ligadas. Para la expresión y purificación de ambas proteínas recombinantes se utilizó el mismo método, así como para la comparación y verificación de estas, obteniendo 6,7 mg/mL y 5,4 mg/mL de PNGase y Endo H correspondientemente, asimismo se realizó geles SDS de poliacrilamida al 15 % para verificar las proteínas según su peso molecular, las cuales indicaron los respectivos vi de 29kDa y 36kDa, además se comprobó nuevamente con un Western Blot anti His, demostrando que los métodos de aislamiento, expresión y purificación fueron precisos y específicos para el desarrollo de las proteínas anteriormente mencionadas Palabras claves: Expresión protéica, purificación, PNGase, Endo H, identificación, transformación y aislamiento
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    Análisis y evaluación del tiempo de negativización de la prueba molecular (qRT-PCR) para la detección de SARS CoV-2 (COVID-19) y surelación con los rangos etarios. Enero - marzo del 2022
    (Universidad Católica de Santa María, 2023-11-17) Bejarano Rosales, Jaime Valentín
    En el presente trabajo de investigación se plantea principalmente determinar el tiempo de negativización de la prueba molecular qRT-PCR para la identificación SARS CoV-2 (COVID- 19) y su relación con los grupos etarios de los pacientes, en muestras obtenidas de un Laboratorio de Diagnóstico Molecular en la ciudad de Arequipa; en el período comprendido entre enero a marzo 2022. De un total de 223 pacientes de los que se tomaron las muestras de hisopado nasofaríngeo y orofaríngeo, el 63.38% presentan edades entre los 30 y 59 años, un 28.25% entre los 18 y 29 años y por último el 8.07% presentan 60 años o más. El 89.69% son personas del sexo masculino y un 10.31% son personas del género femenino. el 52.91% presentaron resultados negativos a la prueba qRT-PCR del SARS-CoV-2 en la semana 3, el 33.18% en la semana 2, el 8.52% en la semana 4, un 3.14% para la semana 5, un 1.79% en la semana 6 y solamente un 0.45% en la semana 1. Se observo que para el valor mínimo de días para dar negativo en la prueba fue de 6 días y el máximo fue de 40 días, con un promedio de días para dar negativo de 17.47 días, para el grupo de pacientes con edades comprendidas entre los 18 y 29 años con un valor promedio de días para dar negativo fue de 15.25 días, los pacientes con edades entre los 30 y 59 años presento un promedio de días para dar negativo de 17.88 días, y para los pacientes con edades comprendidas entre los 60 o más años el valor promedio de días para dar negativo de 21.94 días. En relación al objetivo general y luego de analizados los resultados obtenidos se ha evidenciado la existencia de una relación significativa, con una confianza del 95% para la prueba Chi cuadrado con un valor Χ2c de 20.629 > Χ2t de 18.307, para 10 grados de libertad, concluyendo que existe una relación entre el tiempo de negativización de la qRT-PCR SARS- CoV-2 (COVID-19) con los grupos etarios, de las muestras obtenidas de un Laboratorio de Diagnóstico Molecular en la ciudad de Arequipa; del período comprendido entre enero a marzo 2022.
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    Avances en biomateriales aplicados a la ingeniería de tejidos neuronales: una revisión con enfoque en materiales híbridos
    (Universidad Católica de Santa María, 2025-12-11) Rodriguez del Carpio, Debora Dajhana
    El deterioro del tejido nervioso como consecuencia de lesiones traumáticas, enfermedades neurodegenerativas o accidentes representan un desafío para la medicina regenerativa, debido a la dificultad y la limitada capacidad de autorreparación del sistema nervioso. Ante ello, la ingeniería de tejidos neuronales ha emergido como una alternativa prometedora que combina células madre, factores bioactivos, andamios tridimensionales que poseen propiedades biomeméticas. El diseño de los andamios requiere el uso de biomateriales que sean biocompatibles, biodegradables, mecánicamente estables y en muchos casos que sean electroconductores. Los biomateriales utilizados pueden ser de origen natural o sintético, cada uno con ventajas y limitaciones. Una nueva propuesta para superar estas limitaciones es el desarrollo de biomateriales híbridos, los cuales integran propiedades complementarias de distintos materiales para potenciar la eficacia de los andamios en la regeneración neuronal. Es un campo emergente por lo que muchas combinaciones potencialmente beneficiosas aún no han sido exploradas en profundidad. El presente trabajo consiste en una revisión bibliográfica que examina los principales biomateriales aplicados a la ingeniería de tejidos neuronales, con énfasis en los materiales híbridos y compuestos. Se analizan sus características fisicoquímicas, su comportamiento biológico y sus aplicaciones actuales, además de proponer nuevas combinaciones de biomateriales con potencial aplicación, con el objetivo de contribuir al desarrollo de estrategias eficaces en la neuroregeneración.
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    Desarrollo y validación de la prueba molecular de qPCR para la detección de los genes blaTEM y blaCTX-M en aguas residuales de la Planta de Tratamiento del Fundo La Banda en Huasacache - Arequipa
    (Universidad Católica de Santa María, 2026-05-26) Zegarra Banda, Ariana Camila
    La resistencia antimicrobiana es un problema de salud pública que afecta de manera silenciosa a la población, las aguas residuales son uno de los principales reservorios de genes de resistencia y es necesario contar con medidas adecuadas para eliminar estos genes, el objetivo de este estudio fue desarrollar y validar la prueba molecular de qPCR para detectar los genes de resistencia blaTEM y blaCTX-M en aguas residuales de la planta de tratamiento del Fundo La Banda en Huasacache - Arequipa. Para esto se tomaron 24 muestras del afluente de la PTAR durante 2 meses, las cuales se concentraron con un sistema de filtración, luego se extrajo el ADN bacteriano empleando un kit de extracción por columna, para amplificarlo por la técnica de qPCR que se optimizó; además se realizó secuenciación Shotgun de las muestras y su respectivo análisis bioinformático. Se obtuvo un límite de detección (LOD) de 1.765 pg/μL para ambos genes de resistencia. En la validación analítica se obtuvo un R2 de 0.9946 y 0.9936 con una eficiencia de 96.86% y 90.73% para blaTEM y blaCTX-M, respectivamente. Se detectó para qPCR un porcentaje de positividad de 100% y 27.27% para los genes blaTEM y blaCTX-M, respectivamente y en el caso de secuenciación del 86.36% y 9.09%, respectivamente; qPCR para el gen blaTEM tuvo una especificidad del 100%, un valor predictivo positivo (VPP) de 86% y una exactitud diagnóstica del 86%, y el gen blaCTX-M presentó una sensibilidad del 60%, un valor predictivo negativo (VPN) de 82%, una exactitud diagnóstica del 53% y un coeficiente de Kappa de -0.21. Se desarrolló y validó dos protocolos de qPCR altamente sensible para la detección de los genes blaTEM y blaCTX-M, además, se pudo evaluar estos nuevos protocolos con el secuenciamiento Shotgun.
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    Determinación de la frecuencia de los alelos A1 y A2 del gen CSN2 en bovinos de raza Holstein y bovinos criollos del departamento de Apurímac
    (Universidad Católica de Santa María, 2022-10-20) Zuñiga Aranibar, Dayana Milagros
    La leche bovina es un alimento muy consumido en Perú y estudios han demostrado que la calidad de la leche puede verse afectada por variantes genéticas presentes en las proteínas lácteas; de las cuales la beta caseína constituye el 30%. Las variantes genéticas A1 y A2 son las más comunes de esta proteína. La variante A1 ha sido relacionada con la liberación de un péptido perjudicial para la salud mientras que la variante A2 ha mostrado mejores propiedades para el ser humano. Esta investigación tuvo como objetivo determinar la frecuencia de los alelos A1 y A2 del gen CSN2 (gen que codifica para la síntesis de la proteína láctea beta caseína) en bovinos de raza Holstein de la empresa LACTEA S.A. y en bovinos criollos del departamento de Apurímac, mediante el ensayo PCR-RFLP. Los análisis estadísticos señalaron que en los bovinos raza Holstein las frecuencias genotípicas fueron 0.20 (A1A1), 0.46 (A1A2) y 0.34 (A2A2) y la frecuencia de los alelos A1 y A2 fue de 0.43 y 0.57 respectivamente; mientras que en los bovinos criollos del departamento de Apurímac las frecuencias genotípicas fueron 0.08 (A1A1), 0.42 (A1A2) y 0.50 (A2A2) y la frecuencia del alelo A1 fue de 0.29 y del alelo A2 fue de 0.71. Además, se determinó que ambas poblaciones de estudio se encontraron en equilibrio de Hardy Weinberg. Los resultados mostraron que el genotipo con mayor frecuencia fue el A1A2 en los bovinos raza Holstein y el A2A2 en los bovinos criollos estudiados y que el alelo A2 del gen CSN2 fue el más frecuente en ambas poblaciones; sin embargo, fue significativamente más frecuente en los bovinos criollos del departamento de Apurímac (Valor P < 0.05).
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    Determinación de las Respuestas Celulares Afectadas por la Sobreexpresión de Adamts-1 durante la Progresión Tumoral del Fibrosarcoma
    (Universidad Católica de Santa María, 2018-07-03) Noriega Guerra, Heydi
    El fibrosarcoma es una neoplasia de origen mesenquimal, que se caracteriza por presentar un alto grado de malignidad y agresividad. La progresión de esta neoplasia se ve dictada por su microambiente circundante, puesto que las células estromales y tumorales secretan para la matriz extracelular, una gran variedad de factores biológicamente activos, tales como: factores de crecimiento y enzimas proteolíticas. La ADAMTS-1 (una desintegrina y metaloproteinasa con repeticiones de trombospondina del tipo 1) es una enzima secretada, conocida por inducir cambios en la matriz extracelular y, por lo tanto, influir en el comportamiento de las células tumorales. El presente trabajo permitió evaluar el efecto de la sobreexpresión de ADAMTS-1, sobre la proliferación y migración celular del fibrosarcoma in vitro, así como la capacidad de las células tumorales para formar agregados celulares in vivo. Para este fin, células humanas de fibrosarcoma (HT1080) y células embrionarias de riñón humano (HEK293T), fueron transducidas para sobreexpresar ADAMTS-1. Después de confirmar la eficiencia de la transducción, a través de RT-qPCR y Western Blotting, se analizó el efecto de la sobreexpresión de ADAMTS-1. Así, el ensayo de incorporación de BrdU, mostró que las células HT1080 que sobreexpresan ADAMTS-1, presentaron una disminución en su proliferación celular. Además, mediante microscopía de time-lapse, se observó una disminución de la velocidad de migración de las células HT1080 que sobreexpresan ADAMTS-1. De la misma forma, se observó que la proliferación y la velocidad de migración de las células HT1080 (tipo salvaje) disminuyó cuando estas fueron tratadas con el medio condicionado de otro tipo celular (HEK293T) que sobreexpresa ADAMTS-1. Finalmente, los estudios in vivo, donde se utilizaron embriones de zebrafish transgénicos, demostraron que la sobreexpresión de ADAMTS-1 en las células HT1080, perturbó la capacidad de estas para formar agregados celulares. Por consiguiente, los resultados obtenidos sugieren que la ADAMTS-1 actúa como un factor antitumoral durante la progresión del fibrosarcoma. Palabras claves: Fibrosarcoma, microambiente tumoral, matriz extracelular, ADAMTS-1, proliferación celular, migración celular, agregados celulares.
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    Efecto de los Extractos de Tres Ecotipos de Lepidium Meyenii (Maca) y N-Benciloctadecadienamida en la Expresión Genética de Psen1, Bace1 y App en Células In Vitro de Neuroblastoma Humano Sh-Sy5y
    (Universidad Católica de Santa María, 2018-11-08) Carpio Carpio, José Miguel
    La formación de depósitos de placas de proteína C-amiloide (A?) en el cerebro, pueden evocar la muerte de las células neuronales y perjudicar la comunicación inter neuronal. La formación de dichas placas o simplemente el estrés generado por esta sustancia en las líneas celulares, puede desencadenar diferentes respuestas inmunitarias y moleculares por parte de nuestras células. Producción de Oxido Nítrico, Anion Superóxido y otras especies reactivas de oxigeno (ROS) son respuesta inmunitaria de un organismo. Sin embargo, estas respuestas y otras están mediadas exclusivamente por nuestro material genético. La expresión genética se puede ver alterada cuando existe de por medio un agente estresante. En el presente estudio se ha analizado la expresión genética de APP, BACE1 y PSEN1 en células SH-SY5Y, cuando estas células son sometidas a estrés por ?-Amiloide. Se cultivó 3 x 104 células /mL, dichas muestras fueron tripsinadas y luego recolectadas. Se empleó la técnica de TRIZOL-Alcohol Isoámilico para extraer ARN total, luego se procedió a medir su concentración e integridad, se realizó la síntesis de ADNc. En una cabina de seguridad para PCR se preparó los mix de reacción par qPCR y se procedió a cuantificar los genes APP, BACE1 y PSEN1.Estudios realizados nos sugieren que los 3 ecotipos de Lepidium meyeni (maca amarilla, negra y roja) , así como también N benciloctadecadienamida (M75) reducen los niveles de A? en líneas celulares SH-SY5Y de neuroblastoma humano, reduciendo los niveles de sobre expresión génica de APP, PSEN1 y BACE1 inducidos por el péptido. El gen APP, disminuye su expresión 6.11 veces cuando se administra maca amarilla (0.5ug/mL) por 24 horas, asi como 4.9 veces cuando se incuba por 24 horas con maca a 10ug/mL. EL gen BACE1 presenta mejor respuesta con maca negra, reduciendo 12.6 veces (0.5ug/mL) y 25.5 veces(10ug/mL), en cuanto al gen PSEN1 también la maca negra presentó mejor respuesta, reduciendo 125.9 veces (0.5ug/mL) y 22.3 veces(10ug/mL), incubando por 24 horas. EL ecotipo maca negra, en el gen APP tuvo una mejor respuesta a una concentración de 10ug/mL, reduciendo la expresión genética hasta en 46veces Para el gen BACE1 la concentración de 0.5ug/ml y 10ug/ml de maca negra tuvieron una respuesta similar reduciendo la expresión genética entre53.9 y 42.2 veces. En cuanto al gen PSEN1 la maca negra también presentó mejores resultados, reduciendo 29.4 y 10.9 veces. N- Benciloctadecadienamida (M75), empleado como Co-Tratamiento tiene un efecto positivo en la disminución de la expresión génica inducida por ?-Amiloide, la respuesta de esta macamida sintética es muy parecida en cuanto a resultado cuando se trabaja incubando por 24 y 48 horas, las concentraciones empleadas de M75 (0.5 y 10ug/ml), presentan una respuesta muy parecida. Palabras clave: Lepidium meyenii, N- Benciloctadecadienamida, células SH-SY5Y
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    Evaluación de la actividad citotoxica de saponinas y sapogenias provenientes de residuos de Chenopodium quinoa willd. sobre Lineas celulares SH-Sy5H, Hela A549 y HepG2
    (Universidad Católica de Santa María, 2020-12-01) Carpio Paucar, Génesis Nicole; Palo Cárdenas, Andrea Isawelle
    Actualmente el cáncer es considerado la segunda causa de muerte a nivel mundial habiendo un aumento drástico en su incidencia, las estadísticas indican que hoy en día se diagnostican 10 millones de nuevos casos por año en todo el mundo, y al menos que se prevenga de forma efectiva, se estima que el número aumentará a 20 millones en 17 años. Los tratamientos como; la cirugía, radiación, quimioterapia, terapias dirigidas e inmunoterapias aplicadas por separado o en combinación se usan comúnmente para tratar esta enfermedad, sin embargo, estos pueden causar severos efectos secundarios; es por ello que se necesita encontrar nuevos métodos que sean eficaces y que los pacientes tengan una mejor tolerancia al tratamiento. Las recientes investigaciones están enfocadas en mejorar el uso potencial de compuestos naturales para el tratamiento de esta patología, se sabe por estudios que la quinua (Chenopodium quinoa Willd.) es una planta con altos valores proteicos que soluciona problemas como nutrición; sin embargo dentro de su composición contiene antinutrientes como los saponósidos, también conocidos como saponinas, que son glucósidos naturales compuestos por una sapogenina triterpenoide unida a un monosacárido, tanto la saponina como su aglicón poseen una amplia gama de propiedades biológicas, incluida la actividad citotóxica sobre la cual no se encuentra suficiente evidencia acerca de su efectividad clínica. Nuestro objetivo fue determinar la actividad citotóxica producida por los extractos etanólicos de Chenopodium quinoa Willd (roja y blanca) y los estándares de Acido Oleanólico, Acido Ursólico y Hederagenina en células A549, SH-SY5Y, HepG2 y HeLa, así como conocer la concentración inhibitoria media (IC50) de los mismos, además, se evaluó si la citotoxicidad inducida por las sapogeninas activa la vía apoptótica a través de Caspasa 3 (enzima efectora de la apoptosis), asimismo se valoró la presencia de la proteína PARP-1 (proteína reparadora de ADN) ejecutando Western Blot, la determinación cualitativa de las saponinas y sapogeninas se realizó mediante vi cromatografía en capa fina (TLC) usando el revelador Liebermann- Burchard, por último se determinó cuantitativamente la presencia de sapogeninas en ambas quinuas, empleando cromatografía líquida de alta performance (HPLC). Los resultados obtenidos de IC50 en Acido Ursólico fueron 21.9 μM para A549, 11.2 μM en HeLa, 104.2 μM en HepG2 y 6.2 μM para SH-SY5Y, en el caso de Acido Oleanólico las concentraciones fueron de 98.9 μM para A549, 83.6 μM en HeLa, 408.3 μM en HepG2 y 34.1 μM para SH-SY5Y, con Hederagenina se detectó 78.4 μM, 56.4 μM, 40.4 μM y 12.3 μM en A549, HeLa, HepG2, SH-SY5Y respectivamente. En relación ensayo realizado con Caspasa 3, se determinó que la línea celular HeLa mostró un mayor incremento de actividad caspasa con respecto a las otras líneas celulares, es por ello que se continuó con esta línea para señalar el incremento de las proteínas PARP escindidas frente a Acido Oleanólico, Acido Ursólico y Hederagenina, afirmando que dichas sapogeninas inducen mecanismo de muerte celular mediante apoptosis, se pudo afirmar que entre todos los tratamientos con los 3 diferentes estándares, la concentración que causó una mayor escisión de la proteína PARP fue 100 μM de Hederagenina, por lo que se puede decir que a esta concentración esta sapogenina puede causar muerte celular tipo 1 mediante la vía de las caspasas. Asimismo, los resultados del HPLC mostraron que hay 2.805 mg/g de Acido Oleanólico y 4.715 mg/g de Hederagenina por cada gramo de polvo de Quinua Blanca y 2.65 mg/g de Acido Oleanólico y 7.22 mg/g de Hederagenina por cada gramo de polvo de Quinua Roja.
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    Evaluación del consorcio microbiano aislado de desechos líquidos de tinción “GRAM”, para la biorremediación de aguas sintéticas con cristal violeta
    (Universidad Católica de Santa María, 2019-12-18) Delgado Rospigliosi, Andrea Stephani
    La contaminación ambiental causada por la generación de desechos peligrosos es un problema creciente y globalizado. Los residuos peligrosos, una vez emitidos, pueden permanecer en el ambiente durante cientos de años. En diversos laboratorios tanto clínicos, como universitarios se trabaja con distintas sustancias químicas y se efectúan una serie de operaciones que conllevan a la generación de residuos que, en la mayoría de los casos, son peligrosos para la salud y el ambiente; dentro de estos residuos están los generados en los procedimientos de la coloración de Gram.1 En el presente trabajo, se expone una alternativa biotecnológica para biorremediación de efluentes y aguas sintéticas contaminadas con cristal violeta (CV), siendo este el principal colorante de la tinción de Gram. Se realizó el aislamiento y caracterización de un consorcio aislado de un tanque de desechos líquidos de tinción Gram, teniendo en cuenta su crecimiento, características de inhibición frente al colorante, adaptación a altas concentraciones de CV, decoloración del colorante CV, entre otras. Seguidamente, se evaluó la propiedad de biorremediación del consorcio denominado BIOGRAM conforme al tiempo, a las concentraciones de CV de 150, 200 y 250 mg/L en aguas sintéticas; también se evaluó el efecto de la temperatura a 21 y 37°C y el efecto de la inmovilización; obteniendo los mejores valores a 37°C de 99.2 %, 99% y 98.8%, respectivamente y sin inmovilización con valores de 93%, 92.6% y 91.7%, respectivamente. Datos que respaldan la hipótesis que planteaba utilizar este consorcio BIOGRAM para la biorremediación del colorante cristal violeta. Palabras claves: Medio ambiente, contaminación, cristal violeta, biodegradación, consorcio.
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    Identificación de las Mutaciones C3435T y G2677T/A y Análisis de la Expresión del Gen MDR1 en Pacientes Epilépticos Resistentes a Carbamazepina y Fenitoína del Hospital Honorio Delgado Espinoza de Arequipa - 2018
    (Universidad Católica de Santa María, 2018-10-29) Chirinos Reymer, Alexa Andrea
    La Glicoproteína-P, codificada por el gen MDR1, es una proteína transmembrana y pertenece al grupo de transportadores ABC; actúa como mecanismo de defensa en el organismo exportando varias moléculas, entre ellas los fármacos antiepilépticos, fuera del cerebro, donde deben lograr su efecto terapéutico. A lo largo de nuestro ADN podemos encontrar mutaciones y, es frecuente hallar algunas de ellas en el gen MDR1, las dos más relevantes son C3435T y G2677T/A, que podrían afectar la estructura o funcionamiento de la proteína. Se ha relacionado la presencia de estos SNPs y la sobreexpresión de la Glicoproteína-P con la resistencia a fármacos antiepilépticos, es decir, la falta de reducción del número e intensidad de convulsiones en pacientes tratados con ellos. Este estudio se realizó con el objetivo de identificar las mutaciones ya mencionadas y evaluar la expresión de la proteína en una población de Arequipa. Se recolectaron en total 146 muestras divididas en tres grupos: farmacorrespondedores, farmacorresistentes y controles. Para la identificación de mutaciones se aplicó la técnica de polimorfismos de longitud de fragmentos de restricción (PCR-RFLP) y para medir la expresión del gen MDR1 se utilizó PCR en tiempo real (qPCR). Los resultados para el análisis de mutaciones se reportaron como la frecuencia de los genotipos y la frecuencia alélica. Finalmente se concluyó que la resistencia a los fármacos fenitoína y carbamazepina no está asociada a la presencia de las mutaciones C3435T y G2677T/A ni a la sobreexpresión de la Glicoproteína-P. Palabras clave: Glicoproteína-P, mutación, polimorfismos de longitud de fragmentos de restricción, expresión genética, PCR tiempo real.
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    Identificación de los Polimorfismos de Nucleótido Único (SNP’S), del Citocromo P450, CYP2C9*2 Y CYP2C19*2 Y *3, en Pacientes Epilépticos
    (Universidad Católica de Santa María, 2018-11-12) Valdivia Candia, Carla Fanny
    Los polimorfismos de nucleótido único (SNPs) constituyen una herramienta importante en la biotecnología y en especial en la biotecnología médica, particularmente en el estudio de la medicina personalizada. La variabilidad entre individuos en la respuesta a fármacos, es un grave problema en la práctica clínica y su desarrollo, pudiendo conducir a un fracaso terapéutico o efectos adversos. El citocromo P450 con su subfamilia CYP2C, relacionada al metabolismo de fármacos, se ha vinculado a la resistencia frente al tratamiento de la epilepsia, por lo que el objetivo del presente trabajo fue identificar y reportar polimorfismos de nucleótido único (SNPs), así como la frecuencia alélica en una población representativa de personas tanto con padecimiento de la enfermedad; como sanas, permitiendo conocer el estado polimórfico para poder así contribuir con el éxito del tratamiento; para esto, 80 pacientes epilépticos, entre los 15 y 80 años de edad, atendidos por consulta externa en el servicio de Neurología del Hospital Regional Honorio Delgado Espinoza de Arequipa fueron reclutados, además se incluyó un grupo control con 80 voluntarios no relacionados a la enfermedad, las muestras fueron procesadas en el Laboratorio de Biología Molecular y Farmacología Experimental de la Universidad Católica de Santa María, donde se analizó la genotipificación de CYP2C9 y CYP2C19, para lo cual se realizó la extracción de ADN genómico de células sanguíneas empleando el método de columnas de silica, la evaluación del producto de extracción comprendió de su cuantificación por fluorometría, donde se obtuvo en promedio 37.86 ng/μL de ADN genómico, para las muestras de pacientes epilépticos, y un promedio de 45.03 ng/μL para las muestras de voluntarios control, la calidad del ADN genómico se evaluó por espectrofotometría con la relación A260:A280 nm, donde se obtuvo para los pacientes epilépticos una relación promedio de 1.85, y para voluntarios control el promedio de esta misma relación fue de 1.86, finalmente la integridad del ADN genómico extraído se evidenció a través de la evaluación electroforética, cumpliendo de manera óptima con las condiciones para el análisis molecular; a su vez la identificación de polimorfismos se analizó mediante la amplificación de la secuencia de interés y su posterior digestión con las enzimas de restricción Sau96I (CYP2C9*2), SmaI (CYP2C19*2), y BamHI CYP2C19*3), este procedimiento en dos pasos comprende la técnica de PCR-RFLP que tras el análisis de todas las muestras se pudo concluir que la presencia de las variantes polimórficas en los genotipos y alelos pertenecientes a CYP2C9*2, CYP2C19*2 y CYP2C19*3, de pacientes epilépticos frente a los voluntarios control no presentan diferencia significativa, como tampoco la manifiesta una comparación intergrupal en cuanto a pacientes epilépticos farmacorresistentes y farmacorrespondedores, sin embargo se observó un efecto protector ante la presencia polimórfica de CYP2C9 y CYP2C19, que a pesar de no ser significativo en el presente estudio, también fue reportado por otros, sugiriendo favorecer a no desarrollar resistencia al tratamiento, por su parte el análisis poblacional de distribución genotípica evaluado mediante el equilibrio de Hardy-Weinberg señaló encontrarse en equilibrio para el grupo de voluntarios control, pero fuera de este, para el grupo de pacientes epilépticos lo que se podría interpretar como un cambio evolutivo en la población estudiada. Finalmente en cuanto a la relación del estado polimórfico de los genes CYP2C9*2, CYP2C19*2 y CYP2C19*3, se identificó que sus frecuencias alélicas se encuentran dentro del rango reportado en poblaciones Chinas, Japonesas, y Mexicanas. Palabras clave: CYP2C9, CYP2C19, Polimorfismo de nucleótido único (SNPs), PCR-RFLP