Aproximación venómica y pro-inflamatoria de isoformas de fosfolipasas A2 (PLA2) provenientes de venenos de serpientes de la familia viperidae: Bothorps barnetti, Agkistrodon piscivorus leucostoma y Agkistrodon contortrix laticinctus
Date
2024-10-30
Authors
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Publisher
Universidad Católica de Santa María
Abstract
Las fosfolipasas A2 (PLA2) pertenecen a un grupo de enzimas que se caracterizan por
cumplir un papel importante en los diversos procesos celulares y fisiológicos de los
organismos vivos. En el grupo de las fosfolipasas existe un subgrupo de proteínas que
se conoce como las “PLA2 homólogas”, estas proteínas se caracterizan por no ejercer
actividad catalítica, todo ello a causa de una mutación que tiene lugar en un aminoácido
del sitio activo; sin embargo, a pesar de que estas toxinas no tienen acción lipolítica,
generan efectos biológicos parecidos a los de sus homólogas que son catalíticamente
activas, entre ellas se puede distinguir la miotoxicidad y la inflamación.
En el presente trabajo de investigación se comparó la potencia pro inflamatoria de
fosfolipasas A2 de tres especies distintas que pertenecen a la misma familia viperidae,
PLA2 de Bothorps barnetti, PLA2 Agkistrodon piscivorus leucostoma y PLA2 K49
homóloga de Agkistrodon contortrix laticinctus. Para las tres muestras se realizó el mismo
procedimiento, con la finalidad de purificar las PLA2 y demostrar su potencia pro
inflamatoria, mediante el uso de una columna de interacción hidrofóbica se consiguió
separar diferentes enzimas de las muestras de veneno, las cuales posteriormente fueron
analizadas en una electroforesis PAGE-SDS para aislar muestras de aproximadamente
14 kDa. Seguidamente se realizó una electroforesis bidimensional (2D) de las PLA2
purificadas para determinar posibles isoformas. Con las PLA2 purificadas de las
diferentes muestras de veneno se determinó la actividad fosfolipásica utilizando el
sustrato cromogénico 4-nitro-3-(octanoiloxi) ácido benzoico. Finalmente se analizó el
potencial pro inflamatorio de las PLA2 de las diferentes muestras de veneno, evaluando
los mediadores envueltos en la migración leucocitaria y en el efecto inflamatorio como
son la IL-1 y la IL-6 en miotubos (C2C12).
Se obtuvo como resultado que las tres muestras de veneno de serpientes de la familia
viperidae, a pesar de residir en diferentes ubicaciones geográficas, y tener mutaciones
como es el caso de la PLA K49 de homóloga de Agkistrodon contortrix laticinctu,
mantienen la actividad farmacológica , la cual se encarga de la actividad pro inflamatoria,
como se pudo observar en la evaluación realizada en miotubos (C2C12) , donde se
demostró un aumento de los mediadores dentro de las 3 a 6 primeras horas, demostrando de
esta manera que es un efecto local.
Description
Keywords
Bothorps barnetti, Agkistrodon piscivorus