Desarrollo de un protocolo para establecimiento, multiplicación en biorreactor de inmersión temporal (BIT) y enraizamiento in vitro de Rubus idaeus (Frambuesa) variedad Heritage a partir de segmentos nodales
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Date
2025-03-24
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Publisher
Universidad Católica de Santa María
Abstract
En el presente trabajo de investigación se desarrolló un protocolo para establecer, multiplicar
utilizando un biorreactor de inmersión temporal y enraizar in vitro Rubus idaeus (frambuesa)
variedad Heritage. Se probaron 4 métodos de desinfección de segmentos nodales como
explantes utilizando alcohol al 70% más hipoclorito de sodio (NaClO) al 2.5%, donde se
compararon los tiempos de exposición, 10 y 15 minutos, con la adición y omisión de Tween
20 al 0.1%. Se diseñó y construyó un biorreactor de inmersión temporal basado en el modelo
SETISTM para la multiplicación de los brotes, se evaluaron los tiempos (3, 4 y 5 minutos) y
frecuencias (2, 3 y 4 veces al día) de inmersión en un medio MS suplementado con 1mg/L
de BAP y 0.5mg/L de GA3 con 30g/L de sacarosa. Luego, se analizaron diferentes
concentraciones de las auxinas AIA (1.0 y 1.5 mg/L), IBA (0.2, 0.5 y 1.0 mg/L) y ANA (0.5,
1.0 y 1.5 mg/L) en un medio MS, cuya concentración fue reducida a la mitad (½ MS) para
el enraizamiento de los brotes. Además, se evaluó el efecto de la reducción de la
concentración de la sacarosa a 15 g/L en la fase de multiplicación, tanto in vitro como en
biorreactor y en todos los tratamientos de enraizamiento. Finalmente, se evaluó la eficiencia
de cultivo in vitro frente a biorreactor para la multiplicación de Rubus idaeus.
El mejor tratamiento de desinfección fue un lavado en alcohol 70% por 2 minutos, seguido
de NaClO al 2.5% con Tween 20 al 0.1% durante 15 minutos; obteniendo un 60% de
viabilidad, 20% de oxidación y 20% de contaminación. Se determinó que 4 minutos de
inmersión 3 veces al día fue la configuración óptima para multiplicar los brotes, logrando un
coeficiente de multiplicación de 3.6 y una longitud media de 1.06 cm, sin embargo, no hubo
diferencia significativa entre las configuraciones. Se logró un 100% de enraizamiento y 4
raíces por brote de 3.19 cm utilizando 0.5 mg/L de ANA, donde todos los tratamientos
tuvieron diferencia estadísticamente significativa. En concentraciones mayores a 0.2 mg/L
de IBA y mayores a 0.5 mg/L de ANA se desarrollaron callos basales en los brotes. La
reducción de la sacarosa no tuvo efecto significativo en la multiplicación in vitro. Sin
embargo, si hubo efecto al emplear biorreactor, ya que aumentó considerablemente el
coeficiente de multiplicación llegando a 5.8. En cuanto al enraizamiento, se observó que con
1 mg/L de AIA mejoró la formación de raíces hasta 4.2 por brote de 2.12 cm, mientras que,
con 0.5 mg/L de ANA se desarrollaron callos basales. Por último, se determinó que el uso
de biorreactor logró superar en coeficiente de multiplicación (5.8), altura (1.31 cm) y aspecto
de los brotes frente al cultivo in vitro.
Description
Keywords
Biorreactor, Desinfección, Enraizamiento