Efecto del uso de un líquido ionico en la preparación de muestras biológicas para su observación en el microscopio electrónico de barrido ( MEB)
Loading...
Date
2020-12-22
Authors
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Publisher
Universidad Católica de Santa María
Abstract
El microscopio electrónico de barrido (MEB) permite estudiar estructuras morfológicas
y superficiales de los materiales, a través de la obtención de microfotografías con alta
magnificación y una resolución menor a 1 nm. En la presente investigación se evaluó el
efecto del uso de un líquido iónico (LI) y cuatro tratamientos tradicionales, como
tratamientos de muestras biológicas con alto contenido de humedad para su observación
en el MEB en condiciones de alto vacío.
Para este trabajo se obtuvieron perlas de alginato calcio-mucílago de Salvia hispánica L.
(chía), como muestra orgánica, con alta humedad y baja conductividad debido a su
naturaleza polimérica, por lo que se sugiere darle un tratamiento antes de introducirlas en
una cámara de alto vacío del MEB al igual que otras muestras biológicas con estas mismas
características.
Los cuatro tratamientos tradicionales han utilizado el secado de punto crítico con y sin la
incorporación de fijadores químicos por ejemplo co-reticulantes, aminoácidos y
colorantes que preservan la estructura del espécimen, aumentan el brillo y contraste en
las microfotografías, así también se usa el recubrimiento con metales con el objetivo de
incrementar la conductividad de la muestra y evitar que se cargue.
Aparte de estos cuatro tratamientos tradicionales también se evaluó el efecto del uso del
1 etil 3 metil imidazolio, como tratamientos químico reciente, el cual es un líquido iónico
que permanece líquido a temperatura ambiente o menos de 100 °C debido a la carga
electrostática deslocalizada de sus componentes, también tiene una presión de vapor
insignificante, una conductividad que aumenta con la temperatura, posee una naturaleza
hidrofílica y baja densidad; estas características lo hacen óptimo para utilizarlo en una
cámara de alto vació de un MEB.
Estos métodos se proponen para mantener las características morfométricas iniciales
(diámetro de Féret máximo, relación de aspecto y circularidad) y de textura de las perlas;
durante los tratamientos hasta la observación con el MEB a través de un análisis de
imagen y estadístico utilizando los programas ImageJ y Sigma Plot 14.0 respectivamente.
Los resultados mostraron que las perlas, durante la preparación con los tratamientos
tradicionales y el LI disminuyeron el diámetro de Feret inicial de las perlas en un 22.93%
y 8.69% en promedio respectivamente; sin embargo, las demás características
vi
morfométricas no se vieron afectadas. Luego los resultados de las perlas en la cámara de
alto vacío con los distintos tratamientos mostraron las microfotografías de su morfología,
resaltando el uso del LI al proporcionarle la suficiente conductividad a las perlas para
observar su forma completa en la pantalla, y debido a su naturaleza hidrofílica y presión
de vapor insignificante, la muestra se mantuvo húmeda dentro de la cámara de alto vació
durante el análisis, además por su baja densidad se pudo obtener imágenes con una
resolución y contraste que proporcionan información de los distintos componentes de la
superficie de las perlas al igual que los cuatro tratamientos tradicionales.
En cuanto a sus características morfométricas se observó que el LI sólo afectó el diámetro
de Féret inicial de las perlas disminuyéndolo en un 30.54%; así mismo, la viscosidad del
1 etil 3 metil imidazolio no permitió una distribución homogénea del LI por toda la
superficie de la muestra, de tal forma que se observó la acumulación de este en ciertas
zonas, proporcionando una información de textura superficial lisa a comparación de los
tratamientos tradicionales que resultaron dar una información de textura superficial
rugosa.
En conclusión el efecto del uso del 1 etil 3 metil imidazolio y los tratamientos
tradicionales, como métodos propuestos para mantener las características morfométricas
iniciales de las perlas de alginato de calcio-mucílago de Salvia hispánica L. (chía) y su
observación en el MEB en condiciones de alto vacío, se concluye que todos los
tratamientos disminuyen el tamaño de las perlas pero mantienen la forma de estas,
resaltando el tratamientos con LI, el cual proporcionó una forma simple de preparar
muestras orgánicas y biológicas de alta humedad, por lo que no se necesita un secado y
recubrimiento de las muestras orgánicas como en el caso de los otros tratamientos,
además de conservar su estructura lo que permitió obtener microfotografías de buena
calidad, proporcionando información de su topografía y morfología a través de un análisis
de imagen.
Description
Keywords
Microscopio electrónico de barrido, Vacio, Perlas, Características morfométricas, Textura, Humedad, Conductividad, Análisis de imagen