Maestría en Bioquímica y Biología Molecular

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Browsing Maestría en Bioquímica y Biología Molecular by Subject "Lepidium Meyenii"

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    Efecto de los Extractos de Tres Ecotipos de Lepidium Meyenii (Maca) y N-Benciloctadecadienamida en la Expresión Genética de Psen1, Bace1 y App en Células In Vitro de Neuroblastoma Humano Sh-Sy5y
    (Universidad Católica de Santa María, 2018-11-08) Carpio Carpio, José Miguel
    La formación de depósitos de placas de proteína C-amiloide (A?) en el cerebro, pueden evocar la muerte de las células neuronales y perjudicar la comunicación inter neuronal. La formación de dichas placas o simplemente el estrés generado por esta sustancia en las líneas celulares, puede desencadenar diferentes respuestas inmunitarias y moleculares por parte de nuestras células. Producción de Oxido Nítrico, Anion Superóxido y otras especies reactivas de oxigeno (ROS) son respuesta inmunitaria de un organismo. Sin embargo, estas respuestas y otras están mediadas exclusivamente por nuestro material genético. La expresión genética se puede ver alterada cuando existe de por medio un agente estresante. En el presente estudio se ha analizado la expresión genética de APP, BACE1 y PSEN1 en células SH-SY5Y, cuando estas células son sometidas a estrés por ?-Amiloide. Se cultivó 3 x 104 células /mL, dichas muestras fueron tripsinadas y luego recolectadas. Se empleó la técnica de TRIZOL-Alcohol Isoámilico para extraer ARN total, luego se procedió a medir su concentración e integridad, se realizó la síntesis de ADNc. En una cabina de seguridad para PCR se preparó los mix de reacción par qPCR y se procedió a cuantificar los genes APP, BACE1 y PSEN1.Estudios realizados nos sugieren que los 3 ecotipos de Lepidium meyeni (maca amarilla, negra y roja) , así como también N benciloctadecadienamida (M75) reducen los niveles de A? en líneas celulares SH-SY5Y de neuroblastoma humano, reduciendo los niveles de sobre expresión génica de APP, PSEN1 y BACE1 inducidos por el péptido. El gen APP, disminuye su expresión 6.11 veces cuando se administra maca amarilla (0.5ug/mL) por 24 horas, asi como 4.9 veces cuando se incuba por 24 horas con maca a 10ug/mL. EL gen BACE1 presenta mejor respuesta con maca negra, reduciendo 12.6 veces (0.5ug/mL) y 25.5 veces(10ug/mL), en cuanto al gen PSEN1 también la maca negra presentó mejor respuesta, reduciendo 125.9 veces (0.5ug/mL) y 22.3 veces(10ug/mL), incubando por 24 horas. EL ecotipo maca negra, en el gen APP tuvo una mejor respuesta a una concentración de 10ug/mL, reduciendo la expresión genética hasta en 46veces Para el gen BACE1 la concentración de 0.5ug/ml y 10ug/ml de maca negra tuvieron una respuesta similar reduciendo la expresión genética entre53.9 y 42.2 veces. En cuanto al gen PSEN1 la maca negra también presentó mejores resultados, reduciendo 29.4 y 10.9 veces. N- Benciloctadecadienamida (M75), empleado como Co-Tratamiento tiene un efecto positivo en la disminución de la expresión génica inducida por ?-Amiloide, la respuesta de esta macamida sintética es muy parecida en cuanto a resultado cuando se trabaja incubando por 24 y 48 horas, las concentraciones empleadas de M75 (0.5 y 10ug/ml), presentan una respuesta muy parecida. Palabras clave: Lepidium meyenii, N- Benciloctadecadienamida, células SH-SY5Y
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    Identificación y Cuantificación de Macamidas en Tres Variedades de Lepidium Meyenii (Maca)
    (Universidad Católica de Santa María, 2018-11-08) Paredes Fuentes, Julitza Lindsey
    Lepidium meyenii (maca) es un recurso vegetal que ha alcanzado mucha relevancia en los últimos años debido a que muchas de las propiedades que la medicina tradicional le atribuía, han sido comprobadas científicamente. Es así que algunas de las propiedades verificadas o comprobadas son; el efecto sobre la espermatogénesis, efecto sobre el aprendizaje, actividad citoprotectora en condiciones de estrés oxidativo, función antiproliferativa a nivel prostático. Estas propiedades son atribuidas a los metabolitos secundarios que contiene, siendo uno de los principales compuestos conocidos las macamidas, que no son otra cosa que ésteres del ácido bencílico y sus derivados con ácidos grasos saturados e insaturados. Como es conocido, las condiciones climatológicas y edafológicas pueden no solo influenciar en la cantidad de metabolitos secundarios presentes, sino que también pueden afectar el color de las raíces del vegetal. Esto da lugar a la existencia de diferentes ecotipos de Lepidium meyenii, encontrándose entre los más comunes las variedades, amarilla, roja y negra En el presente trabajo se ha procedido a obtener extractos pentánicos por re-extracción continua líquido-líquido de extractos metanólicos de las 3 variedades mencionadas. En estos extractos ha sido posible la identificación y cuantificación de las siguientes macamidas; N-(3-metoxibenzyl) tetradecanamide (1), N-benzylhexadecanamide (2), N- (3-metoxibenzyl) hexadecanamide (3), N-benzyloctadecanamide (5), Nbenzyltetracosanamide (11). Esto fue posible gracias a que el laboratorio de farmacología del MCPHs University donó los estándares correspondientes. Esta cuantificación requirió un proceso de adecuación y estandarización de la técnica analítica cromatográfica con el fin de contar con resultados confiables, varios parámetros analíticos mostraron que el sistema cumple con los requisitos para un método validado. La respuesta del detector fue lineal en el rango de concentración de 0.25 a 50 ?g/mL; con coeficientes de correlación mayores a 0.95, se obtuvo una precisión aceptable, con valores máximos de 4.097% para las concentraciones más bajas utilizada para el estándar (11) y (1); mientras que el resto está por debajo de 2%, los límites de detección y cuantificación variaron entre 0.10 y 0.64 ?g/mL entre las macamidas analizadas y la exactitud fue evaluada al contaminar las muestras con una cantidad conocida de estándar, obteniendo un porcentaje de recuperación entre 80.91% - 101.26%. La evaluación de los extractos, mostró la ausencia de la macamida (11) en las tres variedades analizadas. Adicionalmente, el contenido del resto de las macamidas analizadas fue menor en la maca negra y roja frente al de la maca amarilla. Cabe mencionar que la macamida más abundante fue la N-benzylhexadecanamide (2) en los tres ecotipos siendo en el extracto de maca amarilla donde se encontró la concentración más alta de N-benzylhexadecanamide (2), 58.14 ±1.8 mg/g de extracto, mientras que en las otras dos variedades la concentración de la misma no superó los 20 mg/g de extracto. Adicionalmente mencionar que de las macamidas restantes se encontraron concentraciones inferiores a 3 mg/g de extracto Palabras clave: Lepidium meyenii, macamidas, ecotipos