Browsing by Author "Flores Mancilla, Nicol De Jesus"

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    Expresión de RORyt y RORy en diferentes tipos celulares y bajo diferentes condiciones de estimulación
    (Universidad Católica de Santa María, 2021-02-17) Flores Mancilla, Nicol De Jesus
    RORγ y RORγt son isoformas del gen humano RORC, difiriendo en el extremo N-terminal. RORγ se expresa en una amplia variedad de tejidos, como hígado, pulmón y músculo esquelético, entre otros; mientras que, RORγt se expresa exclusivamente en ciertas células del sistema inmune. RORγt es considerado como el factor de transcripción maestro de los linfocitos Th17. Estos linfocitos son de gran importancia en el estudio del VIH ya que son las primeras células que se infectan luego del ingreso del virus al organismo. El objetivo del presente trabajo fue cuantificar la expresión de RORγ y RORγt en diferentes tipos celulares utilizados en la investigación del VIH. Se estableció que un ensayo de RTPCR es adecuado para la cuantificación de ambas isoformas en las células estudiadas. Los resultados mostraron que RORγt se expresa de manera preferencial en células Jurkat y en linfocitos T CD4+ humanos, mientras que RORγ lo hace en las células TZM-bl y HT-29. Adicionalmente, se utilizó el análisis por citometría de flujo para medir la expresión de RORγt en linfocitos T CD4+ luego de diferentes estimulaciones. El ARNm de RORγt es inducible mediante anti-CD3/CD28 en linfocitos T CD4+, pero no en células Jurkat ni en células ACH-2. A nivel de proteína, RORγt sólo es inducido por anti-CD3/CD28, pero no por PMA/Ionomicina ni IL-2, luego de 24 h de estimulación. En conclusión, la técnica RT-PCR es un ensayo cuantitativo apropiado para evaluar la expresión en tiempo real de RORγt y RORγ en diferentes tipos celulares, los cuales se utilizan ampliamente en la investigación del VIH, contribuyendo al estudio de la infección y la latencia de dicho virus. Las isoformas RORγt y RORγ presentan una expresión diferencial en células Jurkat y linfocitos T CD4+, y en células TZM-bl y HT-29, respectivamente. Asimismo, su expresión varía bajo diferentes condiciones de estimulación. La estimulación del TCR con anti-CD3/CD28 es la más apropiada para estudiar la expresión de RORγt, tanto a nivel de ARNm como de proteína, en linfocitos T CD4+, ya que induce la expresión de esta isoforma. Por el contrario, ninguna de las estimulaciones evaluadas induce la expresión de RORγ.